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Pfu DNA 聚合酶

Pfu DNA 聚合酶

简要描述:

本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol 基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3’-5’外切酶(校正)活性,当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围Z广的高保真DNA聚合酶,其错误率仅为1.3x10-6,推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

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更新时间:2017-08-15

 

· Pfu DNA 聚合酶说明 
本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol 基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3’-5’外切酶(校正)活性,当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围zui广的高保真DNA聚合酶,其错误率仅为1.3x10-6,推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

· Pfu DNA 聚合酶用途 
用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA拼接、引入突变、全基因合成等(参见 Sinobio 实验方案)。

· 产品特点 
高保真:Pfu DNA聚合酶是使用zui广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例一)。
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。
便利:10μl, 25μl 或50μl体系全部适用。

· 质量保证 
经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;
PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。

Pfu DNA聚合酶(5 U/μl)50 μl
dNTP 混合液 (各10 mM)250 μl
10 × Pfu Buffer with Mg 2+1 ml

 

目录号规格备注价格说明书下载
E002-01A250U含dNTP230元 
E002-01BA包装×5含dNTP1035元
E002-02A250U不含dNTP 180元
E002-02BA包装×5不含dNTP 810元
 


· 使用建议

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3’端"A"突出,其PCR产物的克隆有两种方案。
1. PCR前引物进行5’端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中(参见 Sinobio实验方案)。
2. 将产物3’末端加A后再与T-Vector连接(参见 Sinobio 实验方案)。
3. 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配置反应体系,并zui后加入Pfu酶。

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