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ELISA四种检测法优缺点比较

  • 发布日期:2017-01-17      浏览次数:1126
    •    ELISA四种检测法优缺点比较 
        ELISA检测是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫剖析技术。酶联免疫吸附实验的规范程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再参加一级检测抗体(primarydetection Ab),构成一个抗原抗体的复合物。若是该抗体现已用酶(enzyme)符号了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可运用另一个酶符号的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的办法是参加该酶的底质(substrate),作用后发作呈现的色彩深浅和样本中的抗原量呈正比的,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。
        1.直接法(direct ELISA)
        将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
        优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。
        缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。
        2.间接法(indirect ELISA)
        此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
        优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它zui多的免疫反响性。
        缺陷:交互反响发作的机率较高。
        3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)
        被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原部位。
        优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。
        缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体部位。
        4.竞争法(competitive ELISA)
        样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够越多的抗体,而固定抗原就只能到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。
        优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。
        缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。
        ELISA技术:
        根据细胞法(cell-based ELISA):
        是一种新的定性蛋白检测技术,将细胞直接在微孔板里培育,待检测时,不需抽提蛋白和裂解细胞,便可直接丈量微孔板里蛋白经影响或抑制作用后的改变。
        优势:无需裂解细胞,所以方针蛋白丢失zui少,可测定完好细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。
        缺陷:不能测定抗原量。
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