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荧光定量中定量与相对定量有什么区别?

  • 发布日期:2019-01-17      浏览次数:1167
    •   荧光定量中定量与相对定量有什么区别?
        荧光定量通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。
        定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目,即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。
        举例来说,如果研究项目中包括处理过的和未经处理的对照样本,通常可以将未经处理的样本为基准,规定其目的基因浓度为100%,将经处理的样本的定量结果除以对照样品的定量结果,就可以计算各个处理样本的基因含量相对于未处理样品的百分比。
        定量实验必须使用已知拷贝数的标准品,必须做标准曲线。相对定量可以做标准曲线,也可以不做标准曲线。
        相对定量实验有两种方法:标准曲线法和CT值比较法。如果使用标准曲线法,可以使用标准品,也可以使用相对标准品,而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品,典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。
        CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系,来计算不同样本之间的相对百分比,其计算公式是。
        定量的数据易于理解,但是标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。有许多商业性的标准品试剂盒供选购,可以解决这种困难。
        相对定量的标准品容易在实验室里自己制备,但是数据处理比较麻烦,对实验数据的解释有一定难度。
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