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蛋白酶抑制剂技术原理和分类
发布时间:2019-09-09   点击次数:250次
     蛋白酶抑制剂技术原理和分类
    当细胞破碎的时候,蛋白水解酶就会被释放出来或被激活,使电泳结果复杂化,影响终结果分析。为了避免这些情况的出现,建议在样品制备时尽可能在低温下进行。此外,许多蛋白酶在PH9以上就失活了,因此Tris碱,碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性,此时应当使用蛋白酶抑制剂。因此对于我们想要研究的蛋白来说,选择性和有效的抑制这些蛋白酶对于蛋白纯化路线设计来说显得尤为重要。
    在与蛋白相关的检测中,首先关键的一步便是蛋白质的提取。蛋白质的提取过程中,蛋白水解酶就会被释放出来或被激活,影响终的结果。为了避免这些情况的出现,可以在样品制备时尽可能低温下进行。此外,许多蛋白酶在pH9以上就失活了,因此Tris-base,碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性,此时,我们可以通过加入各种蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。
    根据催化中心结构的不同蛋白酶可分为以下4类:
    1、丝氨酸蛋白酶
    在其活性中心含有丝氨酸和组氨酸,如糜蛋白酶、弹性蛋白酶、血纤维蛋白溶酶、凝血酶、枯草杆菌蛋白酶、胰酶等。
    2、半胱氨酸蛋白酶(又称硫醇或SH蛋白酶)
    在其催化中心含有半胱氨酸,如钙蛋白酶、组织蛋白酶B/C/L、木瓜蛋白酶等。
    3、天(门)冬氨酸蛋白酶(羧基蛋白酶)
    在其活性中心含有天(门)冬氨酸,如组织蛋白酶D、木瓜蛋白酶、肾素等。
    4、金属蛋白酶
    在其催化中心含有金属离子,如氨基肽酶、羧基蛋白酶A/B、嗜热菌蛋白酶等。
    除了蛋白酶抑制剂以外,在许多研究过程中,尤其是一些制药公司和研究院所在研究药理学机理的时候,需要了解蛋白磷酸化途径,因此一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态,所以蛋白抽提的另一个重要保护过程就是对磷酸化状态的有效保护。

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