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你对荧光定量PCR了解了多少
发布时间:2019-11-20   点击次数:213次
   提到PCR,相信在实验室待过的同学并不会很陌生,这个由美国科学家Mullis在1985年发明的聚合酶链反应,至今在世界范围内都有广泛的应用,作为生物学实验的一个重要的方法,其有着不可估量的作用。
  什么是荧光定量PCR
  我们知道,DNA有着双螺旋结构,当温度达到95摄氏度时,双链的DNA会分解成为单链状态,而在温度到达72摄氏度左右时,DNA聚合酶会沿着磷酸到五碳糖的方向进行合成。聚合酶链反应PCR就是通过不断地调节温度,以数量级的速度增加DNA数量的方法。
  而实时荧光定量PCR是指,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
  实时荧光定量常用的荧光化学分类有染料法和探针法。其中,探针法可以更加地对需要检测的DNA片段进行染色,一般情况下,探针法的特异性更高。
  荧光定量PCR的价值
  事实上,大多数病毒在感染动物以后,会在感染后的7天左右产生特异性抗体。此后,当同种病毒再次入侵时,机体会迅速的产生高水平抗体,以中和这些病毒。这个过程被称为机体的特异性免疫反应。
  依照生物体的这个特点,一般情况下,科学家会采用PCR或酶标进行实验检测。但也有意外,比如目前国内较为流行且对养猪业造成惨重损失的“非洲猪瘟病毒”,该病毒的自然宿主只有家猪,野猪,钝缘软蜱,但除猪只本身之外,人、车、物、料、等环境中携带有非洲猪瘟病毒都会造成非洲猪瘟的传播,进而威胁到猪群的安危。
  更为可怕的是,这种病毒侵入猪只体内后,猪只在产生抗体之前就会走向死亡,死亡率高达90%~100%,自2018年非洲猪瘟进入中国以来,将近一年时间,对我国畜牧业造成了上百亿的损失。此时,由于酶标法检测的是动物产生抗体后的感染情况,显然,对待这种烈性病毒来言,其价值远远低于荧光定量PCR。
  荧光定量PCR有着高灵敏性、高度、方便省时等特点,他可以在短时间内,将一个微量的特种DNA扩增到一个足以监测到的数量级。由于在体内达到一定数量级会造成生物体死亡,这相当于是在和动物体内的病毒赛跑,以达早发现,早处理的效果。

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