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培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质
发布时间:2020-09-09   点击次数:25次
  培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
  1、培养基的过滤澄清
  液体培养基必须绝对澄清,琼脂培养基也应透明无显著沉淀,因此,须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求.一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应折叠成折扇或漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂.
  琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤.亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤.新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去,再用滤纸反复过滤.如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法.即将冷却至55至60℃的培养基放入大的三角烧瓶内,装入量不得超过烧瓶容量的1/2,每1000毫升培养基加入1至2个鸡蛋的蛋白,强力振摇3至5分钟,置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可.
  2、培养基的分装
  培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内.分装量不得超过容器装盛量的2/3.容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者).分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器.分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当.分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌.每批培养基应另外分装20毫升培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基最终pH之用.
  3、培养基的灭菌
  一般培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌15分钟的方法.在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌.
  某些畏热成分,如糖类,应另行配成20%或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基.明胶培养基亦应用较低温度灭菌.血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃左右的培养基中.
  琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固.
  4、培养基的质量测试
  每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去.并测定其最终pH.
  将全部培养基放入36±1℃恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去.
  用有关的标准菌株接种1至2管或瓶培养基,培养24至48小时,如无菌生长或生长不好.应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用.
  5、培养基的保存
  培养基应存放于冷暗处,最好能放于普通冰箱内.放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天.每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签.

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