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ELISA检测中不同样品应有不同的处理方法

  • 发布日期:2015-10-09      浏览次数:1423
    •  在进行ELISA检测试验过程中,是否正确处理样品是Elisa检测的*步,也是zui重要的一步,一般来说,可用于ELISA检测的样本包括血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆液等等类型,那么这几种不同类型的样本在处理方法上都有什么不同呢?
        1、对于血清的处理
        血清是ELISA检测中zui常见的一类样本,处理方法也比较简单只需用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。在采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
        2、对于血浆的处理
        对于血浆的处理我们需要用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
        3、对于细胞裂解液的处理
        1)吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
        2)收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
        3)加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
        4)将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
        5) 4℃ 10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
        4、对于组织匀浆液的处理方法
        1)将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
        2)将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分。
        3)将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。
        4)吸取匀浆液到离心管,4℃ 5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
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