胎牛血清注意事项及细胞培养中如何防止黑点生成

　　小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?
　　来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
　　组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。
　　血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。
　　细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
　　一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
　　如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
　　(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
　　(2)血清质量不好，反复冻融的结果;
　　(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
　　(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
　　(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
　　细胞培养中如何防止黑点生成?
　　(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
　　(2) 培养基无需37℃水浴。
　　(3) 培养基保持*佳PH值7.0- 7.2。
　　(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
　　(5) 掌握细胞传代的*佳时机，细胞切勿生长过老。