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胎牛血清注意事项及细胞培养中如何防止黑点生成
发布时间:2019-12-25   点击次数:285次
  小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?
  来源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
  组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。
  血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ,应先将血清至于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
  细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
  一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
  如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
  (1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
  (2)血清质量不好,反复冻融的结果;
  (3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
  (4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
  (5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
  细胞培养中如何防止黑点生成?
  (1) 尽可能地减少血清冻融次数。
  (2) 培养基无需37℃水浴。
  (3) 培养基保持*佳PH值7.0- 7.2。
  (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
  (5) 掌握细胞传代的*佳时机,细胞切勿生长过老。

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