带你认识真正的miRNA定量检测

 　　miRNA定量检测是一类有大约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA定量检测在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA定量检测的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA定量检测 qPCR Detection Kit采用了上*的核酸检测标准技术――Real-Time PCR技术来对miRNA定量检测进行检测，其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
　　miRNA定量检测虽小，却在许多生物过程中扮演了重要角色，而它们也有望成为疾病诊断的标志物以及治疗的靶点。然而，由于成熟miRNA定量检测很小， miRNA定量检测家族成员之间的同源性高，而且miRNA定量检测在体液中的丰度较低，故miRNA定量检测的检测和定量颇具挑战性。近年来，一些miRNA定量检测表达谱分析技术被开发出来，并成功应用于miRNA定量检测表达的定量。
　　miRNA定量检测的检测分为以下三大步骤
　　1、  miRNA定量检测的抽提
　　2、  miRNA定量检测的poly A化及逆转录
　　3、  miRNA定量检测的荧光定量检测
　　由美国小分子RNA研究公司推出来的常规化miRNA定量检测逆转录试剂盒。它是通过Poly A Polymerase 对miRNA定量检测 3'端进行加“Poly A”处理，同时利用M-MLV RTase 及*的Oligo dT Adaptor 对Poly A化的RNA 进行反转录。该试剂盒是目前市场上应用zui普遍、常规的miRNA定量检测逆转录试剂盒，与任何一种品牌的qPCR Mix搭配，都能定量的检测样本中miRNA定量检测的含量，是miRNA定量检测研究的利器，是做miRNA定量检测荧光定量检测的必须试剂。该试剂盒是采用PCR技术结合SYBR Green 嵌合荧光法进行实时荧光定量PCR 的试剂，产品中含有已优化浓度的Hot-start DNA聚合酶、Buffer、dNTP和SYBR Green ，使用时只需加入模板和引物即可进行Real-Time PCR实验，操作方便、快捷，并且重复性好。本产品适合现有市场上所有的荧光定量PCR仪，产品附带的ROX Dye, 可进行反应校正。
　　miRNA定量检测产品特点：基于SYBR Green 法检测的定量PCR反应Mix，采用特殊修饰的Taq酶进行热启动，miRNA定量检测能有效避免非特异性扩增及引物二聚体产生，优化的反应体系，能的进行低拷贝数基因扩增，扩增效率高，能在宽广的范围内进行定量，miRNA定量检测采用2×qPCR Mix包装，使用方便快捷。
　　miRNA定量检测利用每个平台分析16个（必选）和4个（可选）标准化的阳性和阴性对照样品，以评估各种性能，包括特异性、灵敏度、准确性和重复性。他们将每个参数转化成z-分数，以实现平台的直接比较。
　　分 析表明，miRNA定量检测基于相同技术的平台可能有着非常不同的性能。这一点在qPCR平台的重复性和特异性上表现得zui为明显。相比之下，灵敏度是技术相关的，qPCR平 台有着整体上更好的分数。这种出色的灵敏度往往伴随着高的准确性，带来可靠的定量测定。芯片平台的灵敏度较低，即使是起始RNA不受限制可以根据miRNA定量检测的成熟序列，快速定制相应的qPCR assay采用高灵敏的MGB探针和茎环特异性逆转录引物，具有以下特性：
　　1) 特异性好：*的miRNA定量检测引物设计技术及其优化的反应体系避免了转染质粒的污染。
　　2) 分辨率高：能分辨单碱基差异的miRNA定量检测。
　　3) 灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA定量检测原理由于miRNA定量检测s在众多程序的调控，诸如生物发育、细胞增殖和凋亡以及近来被证明与肿瘤发生相关等领域发挥作用，因此miRNA定量检测s的鉴定和定性研究成为迅速发展的一大研究领域。zui典型的鉴定miRNA定量检测s的方法是检测miRNA定量检测的表达谱，如果发现某一种miRNA定量检测在某种特定组织或细胞中特异性表达的话，此miRNA定量检测将被假定在此特定组织或细胞中发挥某种调控作用。同样，如果某一种miRNA定量检测在生物特殊发育阶段表达的话，则它有可能是调控发育进程一个主要分子。