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带你认识真正的miRNA定量检测
发布时间:2014-09-01   点击次数:1013次
   miRNA定量检测是一类有大约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA,其广泛存在于真核生物中。miRNA定量检测在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式,都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此,对miRNA定量检测的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法,这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA定量检测 qPCR Detection Kit采用了国际上公认的核酸检测标准技术――Real-Time PCR技术来对miRNA定量检测进行检测,其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
  miRNA定量检测虽小,却在许多生物过程中扮演了重要角色,而它们也有望成为疾病诊断的标志物以及治疗的靶点。然而,由于成熟miRNA定量检测很小, miRNA定量检测家族成员之间的同源性高,而且miRNA定量检测在体液中的丰度较低,故miRNA定量检测的检测和定量颇具挑战性。近年来,一些miRNA定量检测表达谱分析技术被开发出来,并成功应用于miRNA定量检测表达的定量。
  miRNA定量检测的检测分为以下三大步骤
  1、  miRNA定量检测的抽提
  2、  miRNA定量检测的poly A化及逆转录
  3、  miRNA定量检测的荧光定量检测
  由美国小分子RNA研究公司推出来的常规化miRNA定量检测逆转录试剂盒。它是通过Poly A Polymerase 对miRNA定量检测 3'端进行加“Poly A”处理,同时利用M-MLV RTase 及独特的Oligo dT Adaptor 对Poly A化的RNA 进行反转录。该试剂盒是目前市场上应用zui普遍、常规的miRNA定量检测逆转录试剂盒,与任何一种品牌的qPCR Mix搭配,都能定量的检测样本中miRNA定量检测的含量,是miRNA定量检测研究的利器,是做miRNA定量检测荧光定量检测的必须试剂。该试剂盒是采用PCR技术结合SYBR Green 嵌合荧光法进行实时荧光定量PCR 的专用试剂,产品中含有已优化浓度的Hot-start DNA聚合酶、Buffer、dNTP和SYBR Green ,使用时只需加入模板和引物即可进行Real-Time PCR实验,操作方便、快捷,并且重复性好。本产品适合现有市场上所有的荧光定量PCR仪,产品附带的ROX Dye, 可进行反应校正。
  miRNA定量检测产品特点:基于SYBR Green 法检测的定量PCR反应Mix,采用特殊修饰的Taq酶进行热启动,miRNA定量检测能有效避免非特异性扩增及引物二聚体产生,优化的反应体系,能的进行低拷贝数基因扩增,扩增效率高,能在宽广的范围内进行定量,miRNA定量检测采用2×qPCR Mix包装,使用方便快捷。
  miRNA定量检测利用每个平台分析16个(必选)和4个(可选)标准化的阳性和阴性对照样品,以评估各种性能,包括特异性、灵敏度、准确性和重复性。他们将每个参数转化成z-分数,以实现平台的直接比较。
  分 析表明,miRNA定量检测基于相同技术的平台可能有着非常不同的性能。这一点在qPCR平台的重复性和特异性上表现得zui为明显。相比之下,灵敏度是技术相关的,qPCR平 台有着整体上更好的分数。这种出色的灵敏度往往伴随着高的准确性,带来可靠的定量测定。芯片平台的灵敏度较低,即使是起始RNA不受限制可以根据miRNA定量检测的成熟序列,快速定制相应的qPCR assay采用高灵敏的MGB探针和茎环特异性逆转录引物,具有以下特性:
  1) 特异性好:独特的miRNA定量检测引物设计技术及其优化的反应体系避免了转染质粒的污染。
  2) 分辨率高:能分辨单碱基差异的miRNA定量检测。
  3) 灵敏度高:可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA定量检测原理由于miRNA定量检测s在众多程序的调控,诸如生物发育、细胞增殖和凋亡以及近来被证明与肿瘤发生相关等领域发挥作用,因此miRNA定量检测s的鉴定和定性研究成为迅速发展的一大研究领域。zui典型的鉴定miRNA定量检测s的方法是检测miRNA定量检测的表达谱,如果发现某一种miRNA定量检测在某种特定组织或细胞中特异性表达的话,此miRNA定量检测将被假定在此特定组织或细胞中发挥某种调控作用。同样,如果某一种miRNA定量检测在生物特殊发育阶段表达的话,则它有可能是调控发育进程一个主要分子。
 

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