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浅析慢病毒包装的主要流程

  • 发布日期:2015-12-16      浏览次数:1931
    •    慢病毒属是反转录病毒科下的一个属,包括8种能够感染人和脊椎动物的病毒,原发感染的细胞以淋巴细胞和巨噬细胞为主,感染个体zui终发病,慢病毒感染的显著特点是感染个体在出现典型的临床症状之前,大多经历长达数年的潜伏期,之后缓慢发病,因此这些病原体被称为慢病毒,例如:人类免疫缺陷病毒(HⅣ)、猴免疫缺陷病毒(SⅣ)、马传染性贫血(EIA)、猫免疫缺陷病毒(FⅣ)等等。
        慢病毒包装的主要流程:
        1、慢病毒载体的构建:根据不同的研究需求构建慢病毒载体,如用于RNAi的慢病毒载体、用于基因过表达的慢病毒载体、用于启动子活性研究的慢病毒载体等;
        2、慢病毒包装过程:将重组病毒质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。
        慢病毒包装的注意事项:
        1、在慢病毒感染细胞前,为检测病毒上清培养液内病毒的活性,并确定病毒与转染细胞之间的比率,需要确定病毒的滴度。病毒的滴度可以通过转染Hela细胞,然后使用抗体筛选稳定的细胞转染株,进行计数和数值统计。
        2、在慢病毒转染细胞的过程中zui重要的一步是融合,只有一些较小的慢病毒载体才能转导进细胞,因此,病毒颗粒的吸附是慢病毒转染的限速步骤。
        本公司提供专业的慢病毒包装服务,如果您有需要,敬请来电!
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