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DNA抽提和纯化

DNA抽提和纯化

简要描述:

DNA抽提和纯化主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。

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       DNA抽提和纯化主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有;硅质材料、阴离子交换树脂等。

  DNA抽提和纯化总的原则:
  1、保证核酸一级结构的完整性;
  2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
  3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到zui低程度。

  方法介绍:
  一、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
  二、甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
  三、玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DAN沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
  四、异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)
  五、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
  六、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
  七、碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。

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