miRNA定量检测解读

 　　miRNA定量检测就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于miRNA定量检测的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项重要技术，并成为基因表达差异和文章发表*的部分。miRNA定量检测输出的数据不同于常规PCR电泳检测，很多没有做过miRNA定量检测的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过一些实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑。很多时候，尽管知晓qPCR的原理和基本操作，仍然浪费时间和精力，而得不到好的结果或对大量的数据不知所措。
　　上海基屹生物科技有限公司的miRNA定量检测技术服务，根据实验目的，设计实验方案（相对定量或定量；SYBR Green I或Taqman探针方法），用*按照符合标准（MIQE）的miRNA定量检测试剂完成实验，提供符合文章发表的客观事实实验报告和原始数据。
　　miRNA定量检测是 19~28 nt 的调控RNA分子，主要包括微 RNA（micro RNA，miRNA）和小干涉RNA(short interfering RNA，siRNA)两类，其中的miRNAs成为继 siRNAs之后新的研究热点之一，名列2002年和2003年美国《科学》杂志评出的年度科学成就。
　　miRNA定量检测中的miRNA是长片段RNA序列的一部分，同siRNAs一样是比较短小的单链小分子RNA，一般来源于染色体的非编码区域，由大约70 nt大小的可形成发夹结构的前体加工而来，miRNA定量检测通过与其目标mRNA分子的3 端非编码区域（3-untranslated region，3 UTR）互补导致该mRNA分子的翻译受到抑制。
　　要了解miRNA在基因调控中扮演的角色，很关键的一个方法就是迅速、准确地定量检测miRNA基因的表达。因此，miRNA定量检测表达水平的检测也成为了科学家们研究的热点。但是由于小分子RNA是一类很小的分子，部分小分子RNA表达水平可能很低，因而需要极为灵敏而定量的分析工具。miRNA定量检测常用的检测方法有：
　　1.  Northern blotting
　　2.  核糖核酸酶保护分析以及基于此方法的液相杂交。
　　3.  RT-PCR也被用来miRNA定量检测前体的表达水平， 其他基于PCR技术检测miRNA的方法有引物延伸法，就是在引物的5 末端加一个特异标记，可以定量测定低丰度的RNA含量；原位杂交技术（CISH,FISH）可以方便的检测miRNA的时空表达的差异。
　　4.  芯片(microarrays)技术[46,47]是一种较快的研究miRNA表达的方法。
　　miRNA定量检测方法克服了由于miRNA分子太短（~22 nt）带来的定量zui大难题而引入靶向特异性的反转录引物，该RT引物可以与成熟miRNA结合，形成反转录引物/成熟miRNA复合物，并在miRNA的5’末端延伸。这样就得到一个较长的反转录扩增因子，为进一步做实时定量PCR提供了符合要求的摸板。