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DNA CpG甲基化检测服务

DNA CpG甲基化检测服务

简要描述:

DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式,它不改变DNA的一级结构,却在细胞的发育、基因的表达、及基因组的稳定性中起着重要的作用。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普遍现象,而启动子CpG岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种机制。因此,基因启动子甲基化检测在临床诊断(如甲基化检测与低剂量CT相结合)、药物敏感性检测等方面具有很高的应用价值。

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更新时间:2017-02-28

DNA CpG甲基化检测

甲基化特异性的PCR(methylation-specific PCR)应用

    DNA甲基化在人的正常发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病(如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等)过程中发挥重要作用,已经成为表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容。

    DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式,它不改变DNA的一级结构,却在细胞的发育、基因的表达、及基因组的稳定性中起着重要的作用。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普遍现象,而启动子CpG岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种机制。

    因此,基因启动子甲基化检测在临床诊断(如甲基化检测与低剂量CT相结合)、药物敏感性检测等方面具有很高的应用价值。

甲基化特异性PCR法原理(Methylation-specific PCR,MSP) 

    MSP法的原理是基于DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是*存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是zui主要的甲基化位点,它在基因组中呈不均匀分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域,在哺乳动物中mC约占C总量的2-7%。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达;针对特定区域设计引物,再进行PCR扩增,甲基化的位点可以被当作一个C/T的SNP来处理;可利用直接测序法来判断是否CpG位点发生甲基化。具有方便快捷,灵敏度高的优点,是目前较为常用的甲基化检测方法。

 MSP实验流程:

1.基因组DNA制备,样本类型有:组织,血液,细胞,毛发,唾液等。

2.经亚硫酸氢钠处理后,未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。

3.DNA修饰后,进行纯化及回收。 

4.修饰后的DNA进行PCR扩增。

5.电泳或直接测序检测

6.实验报告(包括MSP基因组DNA,PCR产物及电泳照片)

样品要求
1、基因组DNA(≥1µg),纯度(OD:1.9-2.0)
2、若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料,请提供足够提取1µg以上基因组DNA的材料量。
3.样本运输途中,需要加冰袋,或干冰。

 

 

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