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慢病毒包装服务

慢病毒包装服务

简要描述:

慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组份和特性:比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂期细胞,更重要的,还能感染非分裂期的细胞。利用慢病毒载体,可以研究启动子的调控、过表达特定基因或沉默特定基因。

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 慢病毒包装服务

 慢病毒简介

    慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组份和特性:比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂期细胞,更重要的,还能感染非分裂期的细胞。利用慢病毒载体,可以研究启动子的调控、过表达特定基因或沉默特定基因。

慢病毒包装技术特点

病毒表达系统

腺病毒表达系统

慢病毒表达系统

病毒基因组

双链DNA病毒

RNA逆转录病毒

自主复制

不能

不能

是否整合

病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因

感染细胞类型

感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。

感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。

表达丰度

高水平表达

中水平表达

表达时间

快(1-2 天)

慢(2-4 天)

滴度

滴度可达10E12pfu/mL

滴度可达10E9-10E10TU/mL

克隆容量

可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

RNAi

病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应,一般情况下不适合做RNAi实验

适合,是RNAi实验的优选工具

基因过表达

包装容量较大,可以满足较大基因的包装,是过表达基因的优选工具

包装容量有限,过表达的基因过大时,病毒滴度受到影响

过表达microRNA

适合

适合,是过表达microRNA实验的优选工具

下调microRNA

有报道但不成熟

有报道但不成熟

是否可以自行扩增

可以

需要特殊包装系统和包装环境

 

慢病毒包装服务流程

A. 慢病毒载体的构建:

根据不同的研究需求构建慢病毒载体,如用于RNAi的慢病毒载体、用于基因过表达的慢病毒载体、用于启动子活性研究的慢病毒载体等;

B. 慢病毒包装过程:

    将重组病毒质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。

C. 慢病毒包装结果:

滴定浓度:1×107~1×108TU/ml

zui终体积:1 ml纯化后的病毒液(储存于PBS)

储存:批量储存的zui佳条件为-80°C。

慢病毒包装用途:

慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于:

  • 感染原代细胞;
  • 制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株;
  • in vivo的基因操作;
  • 转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。

 

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