基因组DNA抽提

基因组DNA抽提:

    通过基因组DNA抽提试剂盒可以抽提动物组织、鼠尾、培养细胞、细菌、酵母、动物血液、昆虫以及固定组织的包括基因组DNA在内的总DNA。通过试剂盒说明书中提供的不同操作方法，可以抽提除植物样品外的几乎所有样品中的总DNA。

步骤：
    样品首先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，zui后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。

效率：
   1. 通过试剂盒纯化得到的基因组DNA的长度zui长可达50kb左右，平均为30kb左右，zui短为100bp的DNA也可以被纯化。如需获得更长的基因组DNA，对于哺乳动物样品，包括组织或细胞等，可以使用特定的试剂盒抽提。
    2.通过试剂盒获得的总DNA，OD260/OD280的范围通常在1.7至1.9之间。
    3.试剂盒可以抽提少至数百个细胞，多至25mg组织、0.5-1cm鼠尾、500万个培养细胞、20亿个细菌或5000万个酵母。

     4.样品用量过多，反而会影响抽提效果。如果待抽提样品的DNA含量小于5ng，建议加入适当量的carrier DNA，例如poly-dT或其它对后续实验没有干扰的DNA，也可以加入适当量的carrier RNA，例如yeast RNA等，以改善抽提效果。
    5.试剂盒的标准操作步骤抽提得到的总DNA会含有少量RNA，但如果按照一般的试剂盒可选步骤加入RNase A，就可以获得不含RNA的高纯度总DNA。含有RNA的总DNA可以用于PCR，但对于某些其它的后续反应可能会产生一些影响。

 DNA抽提时样本抽提的范围：  

    纯化柱对于DNA的zui大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以获得10-25微克总DNA。
    
DNA抽提小量试剂盒包装清单：

保存条件：
    蛋白酶K-20℃保存，其余均室温保存。一年有效。蛋白酶K室温（15-25℃）存放一周，活力无明显下降。

DNA抽提注意事项：
    1.抽提细菌、酵母样品时还需要一些特定的试剂，详情请参考相关实验步骤。
    2.如需制备不含RNA的高纯度总DNA，需自备RNase A。
    3.温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。
   4.*次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇，洗涤液II需添加24ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
    5.试剂盒需使用55℃水浴，请提前作好准备。
    6.除特别说明外，每次Vortex应控制在5-10秒左右。
    7.试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
    8.废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
    9.参考使用说明，从某些样品中抽提总DNA不需要使用样品裂解液A。 
    10.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。