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质粒DNA抽提

质粒DNA抽提

简要描述:

质粒DNA抽提通常是指从大肠杆菌中进行小量质粒的快速抽提的方法,通过试剂盒采用新型的离子交换柱,在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足30分钟即可完成。

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质粒DNA抽提:

    通常是指从大肠杆菌中进行小量质粒的快速抽提的方法,通过试剂盒采用新型的离子交换柱,在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足30分钟即可完成。

质粒DNA抽提效率:
    1.每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。

    2.每个纯化柱可用于抽提1-5毫升用LB培养的大肠杆菌。

    3.抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。

    4.抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。

    5.抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。

用途:
   质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等。


所需试剂:溶液I(悬浮液),溶液II(裂解液),溶液III(结合液),溶液IV(洗涤液),溶液V(洗脱液),RNase A(100mg/ml),质粒纯化柱,废液收集管等

保存条件:
    室温保存,一年有效。


注意事项: 
    1.*次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I(悬浮液)中,混匀,并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
    2.*次使用前在每瓶溶液IV(洗涤液)中加入54ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
    3.温度较低时,溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀,37℃水浴加热溶解,混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀,否则会产生大量气泡。
    4.溶液II使用完后,一定要盖紧瓶盖,防止被空气中二氧化碳酸化。
    5.溶液II有强碱性,溶液II和溶液III对人体都有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护。
    6.所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
    7.废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
    8.为了安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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