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siRNA干扰检测服务

siRNA干扰检测服务

简要描述:

RNA干扰 (RNA interference, RNAi)技术,是将与内源mRNA 编码区同源的小片段(19 -23bp)外源双链 RNA(siRNA)导入细胞中,引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解,从而导致特定基因表达沉默(knock down)的一种实验技术。

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更新时间:2017-08-07

siRNA干扰检测服务

原理:RNA干扰 (RNA interference, RNAi)技术,是将与内源mRNA 编码区同源的小片段(19 -23bp)外源双链 RNA(siRNA)导入细胞中,引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解,从而导致特定基因表达沉默(knock down)的一种实验技术,其中通过构建表达载体表达siRNA是多种siRNA制备方法中*有可能进行长期基因沉默研究的方法,siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shrna ,其干扰效果等同于siRNA ,而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所属物种,本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列,在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体并为您进行后续的干扰实验研究。

实验流程

◇ 选择siRNA表达载体 通过人工合成基因的方法将该序列克隆至Clontech公司的RNAi-Ready pSIREN系列表达载体中,该系列表达载体带有Pol III(U6)启动子,具有转染效率高、操作简单、rna沉默效果易于检测等特点,客户可根据需要进行选择。

◇ 设计siRNA靶序列

◇ 根据客户提交的目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19-21nt 长。

◇ 对于每条选定的siRNA 靶序列,设计 siRNA 正义链和反义链,以 loop(9nt or 10nt) 相连,形成稳定的发卡RNA,称为 shRNA(short hairpin RNA)。

◇ 合成模板 合成每条编码 shRNA的DNA 模板,并连接到 siRNA 载体相应的多克隆位点之间。连接产物转化DH5α大肠杆菌。

◇ 抽提阳性克隆质粒 公司试剂盒抽提阳性克隆载体并定量。

◇ 转染细胞 质粒直接转染或通过病毒包装后转染细胞,并对转染细胞进行阳性鉴定和转代细胞株的培养。

◇ 干扰效果检测

◇ 基因水平上检测 提取RNA、反转录、Realtime PCR检测干扰效果(客户自备细胞系)。

◇ 蛋白水平上检测 Western Blot检测蛋白水平干扰效果(客户自备一抗)。

服务周期及价格

服务内容

价格(¥)

周期

siRNA 载体构建1~3个

1800元/个

14个工作日

siRNA 载体构建3~10个

1500元/个

20个工作日

siRNA 载体构建10个以上

询价

协商

细胞培养、转染

5000元/基因

1~2周

基因水平上检测干扰效果

询价(视检测数量商定)

5~6周

蛋白水平上检测干扰效果

询价(视检测数量商定)

5~6周

服务说明

◇ siRNA服务需客户与我们共同讨论实验方案,并提供靶基因名称、序列或GeneBank ID和希望插入载体的名称等,免费为您设计siRNA序列。

◇ 由于构建的siRNA表达载体中插入的片段可以形成hairpin结构,因此可能会影响测序。如果我们对质粒测序结果不理想时,将对由质粒扩增得到的PCR产物进行测序。

◇ 开始实验时公司和客户签订详细的实验技术服务合同、保密合同,客户需预付合同金额的50%作为预付款。

提供结果

实验报告包括:siRNA序列、构建载体的测序报告、荧光定量PCR检测报告、Western Blot图片及全部实验数据和详细的实验步骤。

 

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