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荧光定量PCR技术服务-绝对定量

荧光定量PCR技术服务-绝对定量

简要描述:

实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。 实时荧光定量PCR:在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,Z后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

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更新时间:2017-03-01

绝对定量(Absolute Quantification,AQ)

分析用于确定未知样本中某个核酸序列的绝对量值,即通常所说的拷贝数,应用与病原体检测,转基因食品检测,及基因表达研究。

SYBR Green特性:

(1)只有和双链DNA结合后才发荧光。

(2)变性时,DNA双链分开,无荧光。

(3)在延伸结束阶段采集荧光信号。

(4)SYBR Green也能和非特异性的双链DNA结合发光,所以必须在反应结束时做熔解曲线分析。 

TaqMan探针的特性:

(1)5′端标记有报告基团(Reporter, R),如FAM、VIC等 

(2)3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q)

(3)探针完整,R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ,无荧光, R与Q分开,发荧光(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探针。

绝对定量的标准样品

(1)含有和待测样品相同扩增片段的克隆质粒

(2)含有和待测样品相同扩增片段的cDNA

(3)PCR的产物,可分别做系列稀释。

服务流程:

步骤

客 户 提 供

服 务 内 容

基 屹 提 供

1

新鲜的且尽量多的材料;已知的全长基因序列;尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、丰度等。

DNA/RNA提取,根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。

 

2

纯化好的DNA/RNA(大于5 ug/样品);已知的全长基因序列;尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、丰度等。

根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。

 

3

 

以DNA为模板,对目的基因进行荧光定量PCR检测分析

提供完整的定量分析结果、实验荧光定量扩增曲线及详细的实验步骤。

注意:客户可根据所能提供的起始材料不同,选择从步骤1或2启动项目。

 

 

 

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